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ELISA試劑盒研發的靈敏度
更新時間:2015-05-28   點擊次數:1945次

    此時可用特定的波長(450nm)測讀吸光值。酶標比色儀簡稱酶標儀,通常指于測讀ELISA試劑盒研發結果吸光度的光度計。酶標儀的主要性能指標有:測讀速度、讀數的準確性、重復性、度和可測范圍、線性等等。優良的酶標儀的讀數一般可到0.001,準確性為±1%,重復性達0.5%。酶標儀不應安置在陽光或強光照射下,操作時室溫宜在15~30℃,使用前先預熱儀器15-30 分鐘,測讀結果更穩定。
    測讀A 值時,要選用產物的敏感吸收峰,如OPD 用492nm 波長。有的酶標儀可用雙波長式測讀,即每孔先后測讀兩次,*次在zui適波長(W1),第二次在不敏感波長(W2),兩次測定間不 移動ELISA試劑盒研發板的位置,zui終測得的A 值為兩者之差(W1-W2)。雙波長式測讀可減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質的結合是疏水性的,非離子型洗滌劑既含疏水基團,也含親水基團,其疏水基團與蛋白質的疏水基團借疏水鍵結合,從而削弱蛋白質與固相載體的結合,并借助于親水基團和水分子的結合作用,使蛋白質回復到水溶液狀態,從而脫離固相載體。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20,其濃度可在0.05%-0.2%之間,高于0.2%時,可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗。
    洗板時注意各種試劑盒的洗液不要混用。如果洗液需要稀釋,應按要求稀釋,所用的水電導率在1.5us/cm 之下,洗液如果結晶應待其融解后配制。保證洗板浸泡時間為40 秒左右,孔內液體被洗板機吸收得越干凈洗滌效果更好,手工洗板防止洗液在孔內形成氣泡。

    洗滌在ELISA試劑盒研發過程中雖不是一個反應步驟,但卻決定著實驗的成敗。ELISA試劑盒研發就是靠洗滌來達到分離游離的和結合的酶標記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結合的物質,以及在反應過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質。聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍性的,而在洗滌時應把這種非特異性吸附的干擾物質洗滌下來??梢哉f在ELISA試劑盒研發操作中,洗滌是zui主要的關鍵技術,應引起操作者的高度重視,操作者應嚴格按要求洗滌,不得馬虎。

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