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我司在科研實驗過程中一些基本的操作
更新時間:2017-05-15   點擊次數:1699次

我司在科研實驗過種中一些基本的操作
收集標本:血清、血漿(EDTA)、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測,2-8℃保存48小時;更長時間須冷凍(-20℃或-70℃)保存,避免反復凍融。
洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)
標準品液配制:使用前加入1ml蒸餾水混勻,配成400ng/ml的溶液。設標準管8管,*管加標本稀釋液900ul,第二至第八管加入標本稀釋液500ul。在*管中加入400ng/ml的標準品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul,移至第二管。如此反復作對倍稀釋,從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對照。
檢測程序

加樣:每孔各加入標準品或待測樣品100ul,將反應板充分混勻后置37℃120分鐘。
洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次,向濾紙上印干。每孔中加入*抗體工作液100ul。將反應板充分混勻后置37℃60分鐘。
洗板:同前。每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應板置37℃30分鐘。
洗板:同前。每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗處反應15分鐘。每孔加入100ul終止液混勻。30分鐘內用酶標儀在450nm處測吸光值。
結果計算與判斷
1.所有OD值都應減除空白值后再行計算。
2.以標準品40、20、10、5、2.5、1.25、0.625、0 ng/ml為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上作圖,畫出標準曲線。
3.根據樣品OD值在該曲線圖上查出相應IGF-1R含量。
試劑盒性能
1.靈敏度:zui小的IGF-1R 檢測濃度小于0.3ng/ml。
2.特異性:可同時檢測重組或天然的人IGF-1R。不與人其它細胞因子有交叉反應。
3.重復性:板內、板見變異系數均小于10%。
注意事項
1.以上標準孔及待測樣品均建議做復孔,每次測定應同時做標準曲線。
2.洗滌過程很關鍵。洗滌不充分將導致度誤差及OD值錯誤地升高。
3.板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。
4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。
5.本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷!

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