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ELISA試劑盒靈敏度是可以進(jìn)步的,是真的嗎?
更新時間:2018-01-18   點擊次數(shù):3161次

ELISA試劑盒靈敏度是可以提高的,是真的嗎? 今天小編就分享一篇讓您在實驗中提高ELISA試劑盒靈敏度的方法,拿走不謝!
1、包被液稀釋的抗原(4、8、16、32、64、128ng/ml),用移液器小心將抗原液100μl加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可產(chǎn)生氣泡。每個濃度加4孔(4個復(fù)孔),對照孔4孔加入相同體積的包被液;其中兩孔加入100μl樣本。用保鮮膜包好酶標(biāo)板,將酶標(biāo)板放入底部墊有濕砂布的鋁盒中,放入4℃中包被過夜。
2、洗滌:將酶標(biāo)板孔中的包被液傾干凈,并反扣在干凈的吸水紙上拍干,加入洗滌液洗滌進(jìn)行洗滌。采用浸泡式洗滌法,將洗滌液注滿板孔,放置3min,間歇搖動,浸泡時間不隨意縮短,吸干孔內(nèi)洗滌液,也可甩去洗滌液,反扣在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌4次。
3、封閉:在酶標(biāo)板孔的底部加入封閉液200μl,室溫下封閉1h。
4、ELISA試劑盒1h后將酶標(biāo)板孔中的封閉液傾倒干凈,并反扣在干凈的吸水紙上拍干,然后每孔中加入一抗使用液100μl,注意將抗體液加在酶標(biāo)板孔的底部,避免加在孔壁上部。用保鮮膜包好酶標(biāo)板,將酶標(biāo)板放入底部墊有濕砂布的鋁盒中,并在鋁盒中放一裝有少量水的燒杯,在37℃溫箱中放置2h。
5、2h后取出酶標(biāo)板,傾倒干凈酶標(biāo)板孔中的一抗溶液,并反扣在干凈的吸水紙上拍干。洗滌4次,洗滌方法同2。
6、在酶標(biāo)板孔中加入梅標(biāo)二抗1:4000倍稀釋的溶液100μl,加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可產(chǎn)生氣泡。用保鮮膜包好酶標(biāo)板,將其放入底部墊有濕砂布的鋁盒中,并在鋁盒中放一裝有少量水的燒杯,在37℃溫箱中放置1h。
7、取出酶標(biāo)板,傾倒干凈孔中的二抗溶液,并反扣在干凈的吸水紙上拍干,按2洗滌方法洗滌4次。
8、ELISA試劑盒在酶標(biāo)板每孔中加入底物A液50μl,底物B液50μl,反應(yīng)15min~20min后,在每孔中加入反應(yīng)中止液50μl,在中止反應(yīng)后15min時在酶標(biāo)儀上于450nm處測定OD值。

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