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上海通蔚實業(yè)告訴大家:實驗的常見問題解答
更新時間:2018-03-20   點擊次數(shù):2068次

上海通蔚實業(yè)生物科技有限公司提供試劑盒代測以及實驗室外包服務,如果你想了解更多關于ELISA試劑盒實驗的詳細信息,來函!
 

抗原檢測出的分子量比資料上的大,是怎么回事?
答:a)抗原形成了二聚體。增多巰基乙醇量,煮沸變性時間延長,可以打開二聚體。b)蛋白本身的修飾如:糖基化,磷酸化等
 

蛋白轉移不到膜上,但膠上有,同時Marker 轉上去了,為什么?
答:可能是:a)樣品濃度過低;b)轉移時間不夠,。

要驗證某個細胞上有無該蛋白的存在,需要做免疫組化和western blot試驗嗎?做這兩個試驗時的一抗和二抗可以共用嗎?
答:①免疫組化可以用來進行定位,但是不能定量,而且有時會有假陽性,不易與背景區(qū)分;Western blot可以特異性檢測某個蛋白質分子,進行定量,但是不能定位。
②兩種實驗的一抗有時候不能通用,公司的產品說明一般都會說明可以進行什么實驗,在免疫組化時,是否適合石蠟切片或者冰凍切片。
 

細胞水平要做western blot,多少細胞提的蛋白夠做western blot? 
答:一般5×10^6就足夠了
 

同一樣品能同時提RNA又提蛋白么?這樣對western blot有無影響? 
答:能,沒有問題。
 

同一蛋白樣品能同時進行兩種因子的Western Blot檢測嗎?
答:當然可以,有的甚至可以同時測幾十種樣品。
 

如果目標蛋白是膜蛋白或是胞漿蛋白,操作需要注意什么?
答:如果是膜蛋白和胞漿蛋白,所用的去垢劑要溫和得多,這時加上NaF去抑制磷酸化酶的活性。

 

我的樣品的蛋白含量很低,每微升不到1微克,但是在轉膜時經常會發(fā)現(xiàn)只有一部分蛋白轉到了膜上,就是在轉膜后染膠發(fā)現(xiàn)有的孔所有的蛋白條帶都在,只是顏色變淡了,有什么辦法可以解決?
答:你可以加大上樣量,沒有問題,還有轉移時你可以用減少電流延長時間,加20%甲醇

 

 

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