影響反應因素較多，特別是固相載體的包被難達到各個體之間的一致，因此在定量測定中，每批測試均須用一系列不同濃度的參考標準品在相同的條件下制作標準曲線。
測定大分子量物質的夾心法ELISA試劑盒，標準曲線的范圍一般較寬，曲線zui高點的吸光度可接近2.0，繪制時常用半對數紙，以檢測物的濃度為橫坐標，以吸光度為縱坐標，將各濃度的值逐點連接，所得曲線一般呈S形，其頭、尾部曲線趨于平坦，中央較呈直線的部分是的檢測區域。在實驗條件(包括試劑)較難保證恒定的情況下，這種判斷法較為合適。
在得出標本(S)和陰性對照(N)的A值后，計算S/N值。也有寫作P/N的，這里的P不代表陽性ELISA試劑盒(positive)，而是病人(patient)的縮寫，不應誤解。為避免混淆，更宜用S/N表示。在早期的間接法ELISA中，有些作者定出S/N為陽性標準，現多為各種測定所沿用。實際上每一測定系統應該用實驗求出各自的S/N的閾值。更應注意的是，N所代表的陰性對照是不含受檢物質的人血清。
有的ELISA試劑盒中所設陰性對照為不含蛋白質或蛋白質含量較底的緩沖液，以致反應后產生的本底可能較正常人血清的本底低得多。定性測定的結果判斷是對受檢標本中是否含有待測抗原或抗 出"有"或"無"的簡單回答，分別用"陽性"、"陰性"表示。"陽性"表示該標本在該測定系統中有反應。"陰性"則為無反應。用定性判斷法也可得到半定量結果，即用滴度來表示反應的強度，其實質仍是一個定性試驗。在這種半定量測定中，將標本作一系列稀釋后進行試驗，呈陽性反應的zui高稀釋度即為滴度。根據滴度的高低，可以判斷標本反應性的強弱，這比觀察不稀釋標本呈色的深淺判斷為強陽性、弱陽性更具定量意義。 在間接法和夾心法ELISA試劑盒中，陽性孔呈色深于陰性孔。在競爭法ELISA試劑盒中則相反，陰性孔呈色深于陽性孔。兩類反應的結果判斷方法不同，分述于下。
